标题 | 麒麟竭中龙血素A的药动力学研究论文示例 |
范文 | 麒麟竭中龙血素A的药动力学研究论文示例 1仪器与材料 1.1动物 SD大鼠66只,体质量(250±20)g,雌雄兼备,由中山大学医学院动物中心提供,合格证号:(粤)2006A064。 1.2仪器 Waters高效液相色谱仪:515 HPLC泵,2487双波长吸收监测器,N-2000双通道色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所);TDL80-2B台式离心机(上海安亭科学仪器厂);SCQ5201超声仪(上海超声波仪器厂);ZH-2 BLENDER涡旋混合器(天津药典标准仪器厂)。 1.3材料 广西产龙血竭(广西中医学院制药厂提供);龙血素A对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号:200402);乙腈、甲醇(色谱纯),乙酸乙酯、无水乙醇、冰醋酸(分析纯)。 2方法与结果 2.2血样的采集和处理 大鼠禁食(自由饮水)12 h后,按100 g大鼠给予龙血竭250 mg,灌胃给药。分别在第0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10 h于颈动脉取血,置于用肝素预处理过的离心管中。取全血1 mL置离心管中,加入乙腈2 mL、乙酸乙酯1 mL,涡旋混合均匀,3 000 r·min-1离心10 min,取上清液,提取3次,合并上清液,50 ℃水浴挥干,于残渣中加入100 μL甲醇,超声处理使之溶解,12 000 r·min-1离心10 min,取上清液作为样品,注入高效液相色谱仪进行测定,记录色谱图与峰面积,采用外标法定量。 2.3方法学考察[3] 2.3.1龙血素A对照品贮备液的制备取龙血素A对照品,用甲醇配制成每1 mL约含100 μg的溶液,作为对照品贮备液。 2.3.2方法专属性取大鼠2只,实验前禁食12 h,自由饮水,1只做空白对照,1只按100 g给予龙血竭250 mg灌胃给药,给药2 h后取血样,按“2.2”项下方法操作测定。由图1可见,全血中的内源性物质不干扰龙血素A的测定,表明本方法有较好的.专属性。[PSD261;S*2〗A.空白血浆; B.空白血浆+对照品; C.样品图1 HPLC图谱Figure 1HPLC chromatograms 2.3.3标准曲线与最低检测限取空白全血适量,精密加入龙血素A对照品储备液,配制质量浓度为0.076、0.151、0.302、0.605、1.209、2.418、4.836 μg·mL-1的系列浓度标准溶液,按“2.2”项下的方法,自“加乙腈2 mL、乙酸乙酯1 mL”起,依法操作,记录峰面积。以质量浓度(ρ)为横坐标,峰面积(A)为纵坐标进行回归,结果表明龙血素A的质量浓度在0.076~4.836 μg·mL-1范围内与峰面积线性关系良好,回归方程为:A=49679ρ+2784.3,r=0.998 3(n=7)。取标准曲线用溶液,逐步稀释至溶液中龙血素A的响应值约为基线噪音的3倍(S/N=3),记录色谱图,得出最低检测限(LOD)为0.025 μg·mL-1。 2.3.4相对回收率与精密度精密量取对照品储备液,以空白全血分别配成高、中、低3种质量浓度(4.836、1.209、0.076 μg·mL-1)的样品溶液,按 “2.2” 项下的方法,自 “加乙腈2 mL、 乙酸乙酯 1 mL”起,依法操作。记录峰面积并代入标准曲线计算各样品浓度,计算相对回收率。结果表明,高、中、低3个质量浓度的样品的相对回收率均高于80%。见表1。取以上高、中、低3个质量浓度的样品溶液于同一天内连续测定3次,计算日内RSD;每天测定3种浓度样品各1次,连续测定3 d,计算日间精密度RSD。结果日内和日间精密度RSD值均小于10%,表明该法精密度较好。见表1。 2.3.5样品稳定性精密量取对照品储备液,以空白全血配制质量浓度为0.076、0.605、1.209、2.418 μg·mL-1的样品,分别考察室温25 ℃放置0、4、12、24 h,-20 ℃冰箱放置24 h,-20 ℃下反复冻融3次的稳定性。结果各样品的RSD值均在2.76%~11.42%(n=6)之间,符合《中国药典》相关规定,表明样品稳定性较好。 |
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