《基因工程载体分析报告》-公文写作-写作素材-范文大全-范文网

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基因工程载体分析报告

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基因工程载体分析报告范本

摘要：

基因工程已经成为生物科学中不可或缺的一部分.也是最令人类充满无限遐想的一门科学.自从解开人类基因组后,长生不老等就古老的传说又再度流行起来.尽管现在的基因技术还不能做到让你真的长生不老,但是基因疗法等技术的出现已经让人们看到了基因工程的生命力。基因工程是指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其它载体分子，构成遗传物质的新组合，并使之参入到原先没有这类分子的寄主细胞内，而能持续稳定地繁殖。基因载体是作为基因导入细胞的工具。犹如火箭能把卫星射向九天一样，基因载体可以把目的基因送入靶细胞内，从而发挥目的基因的特定功能。

关键词：基因、载体、运载、自主复制、表达

正文：

载体是指运载外源DNA有效的进入受体细胞内的工具。载体同外源DNA在体外重组成DNA重组分子，在进入受体后形成一个复制子，即形成在细胞内能独自进行自我复制的遗传因子。

1. 基因载体是把基因导入细胞的工具，他的作用是①运载目的基因进入宿主细胞，②使之能得到复制和进行表达。

2. 基因载体的分类：

根据来源：质粒载体、噬菌体载体、病毒载体

根据用途：克隆载体、表达载体

根据性质：温度敏感型载体，融合型表达载体、非融合型表达载体。作为载体必须满足的条件：①有多种限制性内切酶的切点，但每一种酶最好只有一个切点；②外源DNA插入以后载体在受体细胞中自我复制；③有便于选择的标记基因；④具有促进外源DNA表达的调控区。

一、质粒载体

质粒是在许多种细菌中发现的染色体外的遗传因子。它是闭合环状双链DNA分子，大小1kb到200kb不等。能自主复制，但要利用寄主细胞复制染色体的同一组酶系。有某些基因，如抗药性基因，对寄主的生长是有利的。

质粒的复制分松弛型和严谨型两种。松弛型质粒是指质粒的复制跟细菌染色体的复制不同步，一般在一个菌体内能复制10-200 拷贝；严谨型质粒是指质粒复制跟细菌染色体同步，一般含有1-10 拷贝。

1、质粒的基本特性

（1）．质粒的复制

通常一个质粒含有一个与相应的`顺式作用控制要素结合在一起的复制起始区（整个遗传单位定义为复制子）。在不同的质粒中，复制起始区的组成方式是不同的，有的可决定复制的方式，如滚环复制和 θ 复制。在大肠杆菌中使用的大多数载体都带有一个来源于 pMB1 质粒或 ColE1 质粒的复制起始位点。

（2）．质粒的拷贝数

质粒拷贝数分为严谨型与松驰型。严谨型质粒每个细胞中拷贝数有限，大约 1 ～几个；松驰型质粒拷贝数较多，可达几百。

（3）．质粒的不相容性

两个质粒在同一宿主中不能共存的现象称质粒的不相容性，它是指在第二个质粒导入后，在不涉及 DNA 限制系统时出现的现象。不相容的质粒一般都利用同一复制系统，从而导致不能共存于同一宿主中。两个不相容性质粒在同一个细胞中复制时，在分配到子细胞的过程中会竞争，随机挑选，微小的差异最终被放大，从而导致在子细胞中只含有其中一种质粒。

（4）．转移性

质粒具转移性。它是指在自然条件下，很多质粒可以通过称为细菌接合的作用转移到新宿主内。它需要移动基因 mob ，转移基因 tra ，顺式因子 bom 及其内部的转移缺口位点 nic。

2、质粒DNA的制备与注意事项：

细菌的培养：从琼脂平板上挑取单菌落接入5ml含适合抗生素的LB培养基中，于37℃摇床中振荡培养过夜。

保种：取80%灭菌甘油300ul加入1ml菌种中冷冻保存。

质粒提取：

（1）1.5ml过夜培养物倒入EP管，5000rpm/10min，弃上清。

（2）加入150ul冰预冷的solutionⅠ，vortex，使菌分散重悬。

（3）加入300ul solutionⅡ，来回颠倒4-6次，冰上≤5min。

（4）加入225ul solutionⅢ，来回颠倒4-6次，冰上≥5min。

（5）6000rpm/15min（或12000rpm/5min）。

（6）吸上清移入新EP管，等体积酚/氯仿抽提一次，vortex，12000rpm/15min。

（7）吸上清移入新EP管，等体积氯仿抽提，vortex，12000rpm/5min。

（8）重复步骤7）1-2次。

（9）吸上清移入新EP管，0.7倍体积异丙醇沉淀，vortex，12000rpm/15min。

（10）弃上清，1ml70%酒精洗涤1-2次，12000rpm/5min。

（11）弃上清，空气中干燥。

（12）加入10-20ul灭菌ddH2O溶解。

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